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细胞基因操作“指南针” 

腺相关病毒包装服务

腺相关病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)属于微小病毒科 (parvovirus),为无包膜的单链线状DNA病毒。AAV的基因组约4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由145个核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。由于腺相关病毒具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点,已被广泛地应用于基础研究和临床试验中,并且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

腺相关病毒需要辅助病毒如腺病毒、单纯疱疹病毒存在的条件下,才能在感染的宿主细胞中复制合成装配蛋白,产生新的病毒颗粒。野生型AAV感染人宿主细胞后,可定点整合到19号染色体19q13.3qter处,该区域AAVS1可能与ITR和Rep蛋白的作用相关。

与腺病毒相比,腺相关病毒免疫原性较低,有多种血清型,可感染不同组织的细胞。AAV2是目前应用最广的腺相关病毒,对多数常见细胞均有较好效果。AAV-2是天然缺陷型病毒,并且目前还没有发现它和任何的人类疾病有关联。在指南针生物使用的AAV Helper-Free System中,AAV-2 反向重复(ITR)序列和rep/cap基因分别位于缺少共同序列的单独的质粒上,以阻止生产出重组野生型病毒。

AAV Helper-Free System利用已经明确用于调节AAV复制和表达的腺病毒基因产物,并且这些基因产物能通过转染引进宿主细胞。在AAV Helper-Free System中,生产具感染性的AAV病毒颗粒所需的腺病毒基因产物(例如:E2A,E4和VA RNA 基因)大部分由pHelper质粒提供,其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒E1基因的AAV-293宿主细胞提供。本系统包括通过改良HEK293腺相关病毒生产能力而衍生出的AAV-293细胞。通过消除对活的辅助病毒的需求,AAV Helper-Free System提供一个更安全,更纯净和更便利的替代逆转录病毒和腺病毒的基因传递系统。


服务优势:

1.  宿主细胞范围广:腺相关病毒可以感染广泛的哺乳动物细胞,重组腺相关病毒能感染分裂期和非分裂期细胞;

2.  滴度高:可以生产出≥1E12vg/ml的高滴度病毒;

3.  表达出的蛋白质可以正确的折叠和修饰;

4.  表达稳定:长期的基因表达潜能;

5.  多种血清型 : AAV2,AAV5,AAV9

6.  免疫原性低:AAV2的基因组仅4681个核苷酸,便于用常规的重组DNA技术,进行动物实验时造成的免疫反应小;

7.  安全性高:迄今从未发现野生型AAV对人体致病,重组AAV基因组序列上去除了大部分的野生型AAV基因组元件,进一步保证了安全性;


病毒表达系统


      腺病毒表达系统


   慢病毒表达系统


  腺相关病毒系统

病毒基因组


     双链DNA病毒


      RNA病毒


    单链DNA病毒

是否整合

病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因


     低频整合

感染细胞类型


感染分裂和不分裂细胞


感染分裂和不分裂细胞


 分裂和非分裂细胞


表达丰度


      高水平表达



     高水平表达


     高水平表达


表达时间


      快(1-2 天)



     慢(2-4 天)


     快(1-2 天)


滴度


 滴度高达1E12pfu/ml



 最高可达1E9-10TU/ml  


 最高可达1E9-13TU/ml  


克隆容量


可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低



可插入不超过5kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低


可插入不超过3 kb外源DNA片段,滴度随插入片段长度增加而降低  

免疫原性

       

       高免疫原性



     低免疫原性


    低免疫原性

动物模型


   不能得到转基因动物



可产生转基因动物,效率达50以上 



 可产生转基因动物



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