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常规基因敲除相关知识分享

  建立常规基因敲除(knockout,简称KO)小鼠模型,使您感兴趣的靶基因功能在小鼠所有细胞以及整个生命过程中永久缺失。

  通过CRISPR基因编辑技术,构建一个常规基因敲除小鼠模型一般需要4-6个月。

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  根据基因序列设计合成sgRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵,Cas9核酸酶、 sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA ,通过非同源性末端接合(NHEJ)修复途径造成靶基因的移码突变或片段敲除,从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的,可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同,F0小鼠需要繁殖一代,获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。

  通过ES细胞打靶技术,构建一个常规基因敲除小鼠模型一般需要7-12个月。

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  构建以筛选基因新霉素(Neo)取代靶基因的一个或多个外显子的重组载体,转入ES细胞,获得正确发生同源重组的ES克隆。ES细胞进行囊胚注射,获得部分ES来源的嵌合鼠,嵌合鼠与野生型小鼠交配,最终获得来源于重组ES细胞的杂合子小鼠。杂合子小鼠一条染色体上的靶基因指定外显子被Neo基因所取代,杂合子交配获得靶基因失活的纯合子小鼠。

  指南针生物科技提供细胞基因操作实验技术服务,联系方式17350757166。各种载体质粒构建,基因敲低,基因敲除(crispr/cas9/cas12),过表达,诱导表达、病毒包装(慢病毒、腺病毒、腺相关病毒),稳转细胞株构建以及亚细胞荧光定位载体,重组细胞因子等生物试剂,助力科研,解决生物实验技术难关。


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